CUENTA DE PLAQUETAS CON CÁMARA DE NEUBAUER

COMPETENCIAS:

5. Desarrolla innovaciones y propone soluciones a problemas a partir de métodos establecidos.

5.1 Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva, comprendiendo como cada uno de sus pasos contribuye al alcance de un objetivo.

5.6 Utiliza las tecnologías de la información y comunicación para procesar e interpretar información.

OBJETIVO

Realizar  e interpretar la técnica para la cuenta de trombocitos o plaquetas en la cámara de Neubauer.

FUNDAMENTO 

Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemostático del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 μ, de bordes irregulares, pero pueden tener forma esférica u ovalada, carecen de núcleo y son muy frágiles. Provienen de una célula gigante que mide de entre 50-100 μ de diámetro llamada megacariocito.

Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los mecanismos de la hemostasia (Hemos=sangre, stasis=detención) adhiriéndose entre ellas y a las paredes de los vasos sanguíneos lesionados, para formar así el trombo plaquetario o tapón hemostático.

El líquido diluyente puede ser una solución estéril de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo (85 milimolar) y cloruro de sodio (31 milimolar). Este líquido se provee listo para usar y su conservación es indefinida en refrigerador (2 - 10° C) o puede ser también oxalato de amonio al 1%. El fundamento del método consiste en la producción de hemólisis por la utilización de un líquido hipotónico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas y sin agrumar por la presencia de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo.
 MATERIAL

v  Pipeta de Thoma para glóbulos rojos (perla roja)

v  Equipo para venopuncion (Tubo lila)

v  Boquilla roja

v  Tubo de goma

v  Tubos de ensayo

v  Papel parafilm

v  Cámara de Neubauer

v  Cubrehematimetro

v  Microscopio

v  Gasas

v  Caja de Petri

v  Papel filtro

SUSTANCIAS

Ø  Alcohol al 70%

Ø  Sangre venosa

Ø   Diluyente de plaquetas

PROCEDIMIENTO

1.    Obtener 10 ml de sangre venosa, en un tubo con anticoagulante EDTA

2.    Agitar la sangre de manera suave en el tubo para mezclarla con el anticoagulante

3.    Llevar la sangre hasta la marca 1.0 de la pipeta de Thoma. Limpiar la punta con una gasa.

4.    Aforar con liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 11 de la pipeta (Dilución 1:100).

5.    Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto.

6.    Colocar la Cámara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el cubrehematímetro sobre las mesetas.

7.    Descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la cámara, depositándola entre la meseta y el cubrehematímetro y dejarla difundir por capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen burbujas o se derrame el líquido hacia los surcos.

8.    Colocar la cámara de Neubauer  ya cargada en el interior de una caja de Petri, con papel filtro humedecido en agua para evitar la evaporación, dejar en reposo de 10 a 15 minutos.

9.    Observar al microscopio contando en la cuadricula central (para glóbulos  rojos) las plaquetas  que aparecen mucho más pequeñas que los hematíes, redondas, alargadas u ovales, altamente refringentes.

10. El cuadro central de la cuadricula mide 1.0 mm por lado y está dividido en 16 cuadritos más pequeños, de tal manera que el número total de estos últimos es de 400, mismos en los que se lleva a cabo el recuento de plaquetas.

RESULTADOS

Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm³
Después de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el número obtenido se multiplica por el factor de dilución  de la siguiente manera:
N° de plaquetas x mm³ = No. De plaquetas contadas X dilución X 10
Dilución: 1:100 
Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm³ ya que el volumen de la cámara es de 0.1 mm³
El número de plaquetas fue de 535, por lo que al realizar los cálculos quedaron así:
No. de plaquetas = 535 X 100 X 10= 535 000 plaquetas por mm³, lo que indica un índice elevado de plaquetas.

PACIENTE	NO. DE PLAQUETAS	VLOR NORMAL Millones de células/mm3
María Fernanda	375 000	150 000 - 450 000
Yameli Sotuyo	278 000	150 000 - 450 000

Evidencias:

Conclusión: 

esta practica nunca la habíamos hecho y me pareció muy interesante ya que fue algo nuevo para mi. es otro aprendizaje más, la practica fue sencilla y rápida de hacer. 

Determinación de aglutinogenos

GRUPO SANGUÍNEO

Objetivo:

El alumno determinara el grupo sanguíneo y el factor Rh de una muestra sanguínea utilizando los antisueros correspondientes y previa demostración correctamente.

Introducción:

Los grupos sanguíneos se han clasificado así por poseer características diferentes, estas características son los antígenos (aglutinogenos) y los anticuerpos (aglutininas) que son los responsables de las reacciones adversas inmunológicas en las transfusiones.

Material: 

• Equipo de venopunción.
• Placa de vidrio excavada. 
• Aplicadores de madera.
• Lanceta estéril.
• 4 Tubos de ensaye (por muestra de sangre).
• Gradilla.
• Centrifuga.

Reactivos:

• Anti-suero A
• Anti-suero B
• Anti-suero D
• Solución isotónica de NaCl al 0.9%

Método en placa excavada:

1. Se utiliza punción cutánea con la lanceta, se deshecha la primera gota y se deposita una gota en cada una de las excavaciones en forma horizontal o se marcan las letras A, B y Rh, y posteriormente se añade una gota de suero en donde le corresponda.
2. Mezclar perfectamente con un aplicador diferente cada una de las preparaciones.
3. Leer el resultado.

Método en tubo de ensaye:

1. Se utiliza la punción venosa, se deposita 2 ml de sangre en un tubo de ensaye con 9.8 ml de solución isotónica de NaCl al 0.9%, para formar una suspensión de eritrocitos al 2%.
2.  Marcar 3 tubos de ensaye con las letras A,B y Rh y depositar el suero que le corresponde.
3. Añadir a los tubos una suspensión de eritrocitos al 2%.
4. Centrifugar a 1000 r.p.m. durante 1 minuto.
5. Sacar los tubos e inmediatamente ver si existe aglutinación.

Interpretación de los resultados:

Resultados:

Método en Placa excavada. "A" Rh Positivo.

Método en Tubo. "A" Rh Positivo.

Evidencia: 

Conclusión: 

esta practica ya la habíamos elaborado antes pero nos sirvió para poner en prueba el conocimiento que ya teníamos y acordarnos de la técnica.

Recuento diferencial de leucocitos

 El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en un frotis teñido de la sangre.

Al conocer la proporción de las células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíneo, cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyetico podría verse reflejado en un cambio de la proporción de una especie celular. Para el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.

Hay carios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el mas utilizado es el de almena lineal. 

Material y reactivos

1.- Frotis sanguíneo teñido

2.- Microscopio.

3.- Aceite de inmercion

4.- Un contador de células

Procedimiento para la Tincion de Wright

• Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia arriba.
• Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glóbulos sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una cantidad adicional si éste se comienza a evaporar. 
• Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede usarse de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos. 
• Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto rosado al examinarlo a simple vista. 
• Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante. 
• Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión. 

Procedimiento para el recuento diferencial de leucocitos 

1.- Coloca el frotis en el microscopio y se enfoca.

2.-Se le agrega una gota de aceite de inmersión  y se observa con el objetivo de 100x.

3.-Si el recuento se hace en linea se empieza en un borde del frotis hasta el otro borde en linea paralela hasta contar 100 leucocitos.

4.- Se van contando los mononucleares (monocitos y linfocitos) y los polimorfo nucleares (neutrofilos, eosinofilos y basofilos) según su morfología.

5.- Se reporta el % (valor relativo) o en valor absoluto (mm3).

	Adultos	Niños
Linfocitos	20-55%	20-50%
Monocitos	2-6%	0-9%
Eosinofilos	1-5%	0-8%
Basófilos	0-1%	0-1%
Neutrófilos	45-70%	20-60%
Bandas	0-5%	1-6%

Resultados: se pudo observar un monocito, no se encontraron más leucocitos.

Evidencia:

Comentario: esta practica fue muy sencilla de realizar y muy económica por que no se utilizan muchos materiales. aprendimos a diferenciar los leucocitos de acuerdo a su morfología y color al teñirlos.